1,western blot的具体步骤

(PS 楼主可以百度嘛,网上关于WB的实验太多了)Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理 与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。二、试剂准备1、SDS-PAGE试剂:见电泳实验。2、匀浆缓冲液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml;10%SDS 6.0ml;β-巯基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至1000ml。4、0.01M PBS(pH7.4):NaCl 8.0g;KCl 0.2g;Na2HPO4 1.44g;KH2PO4 0.24g;加ddH2O至1000ml。5、膜染色液:考马斯亮兰 0.2g;甲醇80ml;乙酸2ml;ddH2O118 ml。包被液(5%脱脂奶粉,现配):脱脂奶粉1.0g 溶于20ml的0.01M PBS中。6、显色液:DAB 6.0mg;0.01M PBS 10.0ml;硫酸镍胺 0.1ml;H202 1.0μl。三、操作步骤(一)蛋白质样品获得:细菌诱导表达后,可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞,真核细胞加匀浆缓冲液,机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃,13,000g离心15min。取上清液作为样品。(二)电泳:制备电泳凝胶,进行SDS-PAGE。(三)转移:(半干式转移)1、电泳结束后将胶条割至合适大小,用转膜缓冲液平衡,5min×3次。2、膜处理:预先裁好与胶条同样大小的滤纸和NC膜,浸入转膜缓冲液中10min。3、转膜:转膜装置从下至上依次按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好,滤纸、凝胶、NC膜精确对齐,每一步去除气泡,上压500g重物,将碳板上多余的液体吸干。接通电源,恒流1mA/cm2,转移1.5hr。转移结束后,断开电源将膜取出,割取待测膜条做免疫印迹。将有蛋白标准的条带染色,放入膜染色液中50s后,在50%甲醇中多次脱色,至背景清晰,然后用双蒸水洗,风干夹于两层滤纸中保存,留与显色结果作对比。(四)免疫反应:1、用0.01M PBS洗膜,5min ×3次。2、加入包被液,平稳摇动,室温2hr。3、弃包被液,用0.01M PBS洗膜,5min×3次。4、加入一抗(按合适稀释比例用0.01M PBS稀释,液体必须覆盖膜的全部),4℃ 放置12hr以上。阴性对照,以1%BSA取代一抗,其余步骤与实验组相同。5、弃一抗和1%BSA,用0.01M PBS分别洗膜,5min×4次。6、加入辣根过氧化物酶偶联的二抗(按合适稀释比例用0.01M PBS稀释),平稳摇动,室温2hr。7、弃二抗,用0.01M PBS洗膜,5min×4次。8、加入显色液,避光显色至出现条带时放入双蒸水中终止反应。四、注意事项1、一抗、二抗的稀释度、作用时间和温度对不同的蛋白要经过预实验确定最佳条件。2、显色液必须新鲜配置使用,最后加入H2O2。3、DAB有致癌的潜在可能,操作时要小心仔细
百度视频输入western blot就有
其实我看了步骤也不是很明白,,,你弄懂了,可以教教我。。。THANKS

western blot的具体步骤

2,2011四川高考填报志愿的网址

不同地区的好像不一样。。我南充的。。wb.nczsks(南充招生考试).com 括弧内的不算
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2011四川高考填报志愿的网址

3,事业单位与公务员招聘信息在哪能查找全面

事业单位与公务员招聘信息,一般主要可以从以下几个方面获得:1、各个地方的人力资源网站,简单来说就是人事局网站,一般凡是本地方招聘的,都会首先在人事局网站发布招聘信息,当然,有的地方没有人事网站,特别是区县这一级,没有的居多,这个时候你就可以去某某地方人民政府网站,在其政务公开板块,有招聘信息,当然,上面说的都是官方网站。2、网络上的综合招聘网站,一般来说,就是那几个比较出名的,某图、某公、国家公务员招考网、还有地方特色的招聘网站,比如某某地人力资源网站等等,挺多的,当然,这些综合网站不但有事业单位?公务员招聘信息,还有银行、信用社等等,总之涉及到国家财政发工资的招聘信息,他们都有。3、微信头条关注,现在来说,无论是私企网站还是政府网站,都会有自己的公众号,你关注了这些公众号,基本上只要有招聘信息,他们就会给你进行推送,同事,对于一些大型国企的公众号,你也可以关注,这样就能第一时间接收到他们的招聘信息了。
事业单位与公务员招聘信息,一般主要可以从以下几个方面获得:1、各个地方的人力资源网站,简单来说就是人事局网站,一般凡是本地方招聘的,都会首先在人事局网站发布招聘信息,当然,有的地方没有人事网站,特别是区县这一级,没有的居多,这个时候你就可以去某某地方人民政府网站,在其政务公开板块,有招聘信息,当然,上面说的都是官方网站。2、网络上的综合招聘网站,一般来说,就是那几个比较出名的,某图、某公、国家公务员招考网、还有地方特色的招聘网站,比如某某地人力资源网站等等,挺多的,当然,这些综合网站不但有事业单位?公务员招聘信息,还有银行、信用社等等,总之涉及到国家财政发工资的招聘信息,他们都有。3、微信头条关注,现在来说,无论是私企网站还是政府网站,都会有自己的公众号,你关注了这些公众号,基本上只要有招聘信息,他们就会给你进行推送,同事,对于一些大型国企的公众号,你也可以关注,这样就能第一时间接收到他们的招聘信息了。
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事业单位与公务员招聘信息在哪能查找全面

4,填志愿的网址是

http://wb.nczsks.com/scwb/Login_ZY.aspx
现在网上报名还可以更改密码? 你说的是网上填报志愿系统吧? www.whzkb.cn 主页上就是网上志愿填报系统 初始密码是身份证号 http://59.42.244.27/ 志愿系统的地址
ZQ,我是SP。你直接进网站 http://211.67.74.16/wb/index.asp,最上面有更改密码。然后你把你所想改的密码改过来即可。我QQ上有我所发的消息。
6月10日至18日、6月28日至7月3日考生填报志愿网址 01 武汉市 http://www.whzkb.cn http://www.whzkb.cn 02 黄石市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 03 十堰市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 05 宜昌市 http://58.19.178.105/gkzy2009 http://58.19.178.105/gkzy2009 06 襄樊市 http://219.138.57.223 http://211.67.70.8 07 鄂州市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 08 荆门市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 09 孝感市 http://zsks.xgjy.cn http://zsks.xg.e21.cn 10 荆州市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 11 黄冈市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 23 咸宁市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 28 恩施自治州 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 90 神农架林区 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 91 随州市 http://www.hbszzk.com/gkzy2009 http://www.hbszzk.com/gkzy2009 94 仙桃市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 95 天门市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 96 潜江市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn
录取期间,省招办将通过湖北招生信息网( http://zsxx.e21.edu.cn )及时提供考生电子档案运行的七种状态,考生凭高考报名号或准考证号以及身份证号查询。 据介绍,昨日向省招办咨询的九成考生,都涉及录取情况。为此,省招办再次提请考生在录取期间,注意查询电子档案运行的7种状态:  (1)自由可投:表示该考生的档案没有投出去或投出去后又被学校退档,如是被学校退档,考生可以看到最近一次院校退档的理由。  (2)已经投档:表示省招办已将档案投给了院校,但院校还未下载投档信息。  (3)院校在阅:表示院校已下载了投档信息,正在审阅考生的电子档案。院校在阅并不表示考生已经被录取,省招办投给院校的档案数一般多于招生计划数,院校通过阅档后还要退出不予录取的考生档案。  (4)预退档:表示该考生因种种原因院校不予录取,院校向省招办提出退档,对每一个预退档的考生,院校都会注明退档的理由。  (5)预录取:表示院校准备录取该考生,已通过网络将拟录取名单提交给省招办,等待省招办网上录检审核。  (6)录取待审:表示院校拟录取名单已通过省招办网上录检审核,但录取名册还未经省招办审核签字盖章。  (7)录取:表示录取名册已经过省招办办理了审核签字手续,加盖了录取专用章。 下载百度工具栏:随时搜索湖北高考相关信息
http://tbzy-dx.hubzs.com.cn/
http://wb.nczsks.com/scwb/Login_ZY.aspx

5,想测组织中线粒体蛋白 怎么裂解

没看懂什么意思
成功完成Western Blot检测,必须满足4个条件:1,凝胶洗脱:转移期间蛋白质必须从凝胶中洗脱出来,如果蛋白质还截留在凝胶中,将无法在膜上进行分析2,吸附到膜上:在转移过程中蛋白质必须吸附到膜上,如果蛋白不吸附,将无法在膜上进行分析3,处理期间仍截留在膜上:在转移后的处理过程中蛋白质必须保持吸附在印迹膜上4,处理过程中可接近:被吸附的蛋白质必须能够与检测试剂接触,如果蛋白质被掩盖则无法检测成功进行WB检测,则设置合适正确的对照是必不可少的,只要正确设置了这些对照,即可快速和准确的找到WB的问题所在,并保证实验结果的准确性和特异性!一般需要设置的对照如下:阳性对照:明确表达检测蛋白的组织或细胞,用于检测抗体的工作效率阴性对照:明确不表达检测蛋白组织或细胞,用于检测抗体的特异性二抗对照:不加一抗,用于检测二抗的特异性内参对照:检测标本的质量和二抗系统空白对照:不加一抗和二抗;用于检测膜的性质和封闭的效果 WB检测基本过程1、获取细胞或组织裂解物1)根据检测蛋白的位置选择合适的裂解buffer:蛋白位置 推荐buffer全细胞NP-40 or RIPA胞浆(可溶性蛋白)Tris-HCl胞浆(骨架结合蛋白)Tris-Triton膜蛋白NP-40 or RIPA核蛋白RIPA or 核蛋白提取试剂盒线粒体蛋白RIPA or 线粒体分离试剂盒亦可购买商业化的蛋白提取试剂盒来保证标本制备的质量2)选择合适的蛋白酶抑制剂,避免蛋白降解,从而保证检测的准确性!2、蛋白定量常用的蛋白定量方法:Bradford assay, Lowry assay 或BCA assay。定量后,可根据情况将标本保存在-20°C /-80°C备用,进行免疫沉淀(IP)或者直接进行电泳分离蛋白3、电泳分离蛋白质根据待测蛋白状态确定电泳条件: 待测蛋白状态凝胶条件上样buffer电泳bufferReduced - Denatured还原,变性含β-巯基乙醇或DTT,含SDS含SDSReduced - Native还原,不变性含β-巯基乙醇或DTT,不含SDS不含SDSOxidized - Denatured不还原,变性不含β-巯基乙醇或DTT,含SDS含SDSOxidized - Native不还原,不变性不含β-巯基乙醇或DTT,不含SDS不含SDS根据待测蛋白分子量大小确定凝胶浓度蛋白分子量(kDa)凝胶浓度(%)4-402012-451510-7012.515-1001025-20084、转膜根据不同的检测目的和待测蛋白的特性,选择合适的膜类型。常用的转移膜类型有:PVDF膜、NC膜和尼龙膜,其中PVDF和NC膜的使用频率最高。各种膜的技术参数及比较如下:PVDF膜NC膜尼龙膜灵敏度和分辨率高高高背景低低较高蛋白结合能力100-200ug/cm2(适用于SDS存在时与蛋白结合)80-100ug/cm2>400ug/cm2机械强度强干的膜易脆软而结实溶剂抗性强差差使用前是否需要浸润100%甲醛润湿缓冲液润湿缓冲液润湿适用染色方法胶体金、丽春红、酰胺黑、印度墨汁、考马斯亮兰胶体金、丽春红、酰胺黑、印度墨汁不能用阴离子染料适用检测方法显色法、化学发光、荧光、放射性、化学荧光、快速免疫检测显色法、化学发光、荧光、放射性显色、化学发光、放射性适用范围普通蛋白WB、糖蛋白检测、蛋白质测序、氨基酸分析、重复检测普通蛋白WB、氨基酸分析、重复检测。0.1um膜适用于7kDa以下蛋白低浓度小分子蛋白、酸性蛋白、糖蛋白、蛋白多糖、核酸检测常用价格高较低低
没看懂什么意思?
成功完成Western Blot检测,必须满足4个条件:1,凝胶洗脱:转移期间蛋白质必须从凝胶中洗脱出来,如果蛋白质还截留在凝胶中,将无法在膜上进行分析2,吸附到膜上:在转移过程中蛋白质必须吸附到膜上,如果蛋白不吸附,将无法在膜上进行分析3,处理期间仍截留在膜上:在转移后的处理过程中蛋白质必须保持吸附在印迹膜上4,处理过程中可接近:被吸附的蛋白质必须能够与检测试剂接触,如果蛋白质被掩盖则无法检测成功进行WB检测,则设置合适正确的对照是必不可少的,只要正确设置了这些对照,即可快速和准确的找到WB的问题所在,并保证实验结果的准确性和特异性!一般需要设置的对照如下:阳性对照:明确表达检测蛋白的组织或细胞,用于检测抗体的工作效率阴性对照:明确不表达检测蛋白组织或细胞,用于检测抗体的特异性二抗对照:不加一抗,用于检测二抗的特异性内参对照:检测标本的质量和二抗系统空白对照:不加一抗和二抗;用于检测膜的性质和封闭的效果 WB检测基本过程1、获取细胞或组织裂解物1)根据检测蛋白的位置选择合适的裂解buffer:蛋白位置 推荐buffer全细胞NP-40 or RIPA胞浆(可溶性蛋白)Tris-HCl胞浆(骨架结合蛋白)Tris-Triton膜蛋白NP-40 or RIPA核蛋白RIPA or 核蛋白提取试剂盒线粒体蛋白RIPA or 线粒体分离试剂盒亦可购买商业化的蛋白提取试剂盒来保证标本制备的质量2)选择合适的蛋白酶抑制剂,避免蛋白降解,从而保证检测的准确性!2、蛋白定量常用的蛋白定量方法:Bradford assay, Lowry assay 或BCA assay。定量后,可根据情况将标本保存在-20°C /-80°C备用,进行免疫沉淀(IP)或者直接进行电泳分离蛋白3、电泳分离蛋白质根据待测蛋白状态确定电泳条件: 待测蛋白状态凝胶条件上样buffer电泳bufferReduced - Denatured还原,变性含β-巯基乙醇或DTT,含SDS含SDSReduced - Native还原,不变性含β-巯基乙醇或DTT,不含SDS不含SDSOxidized - Denatured不还原,变性不含β-巯基乙醇或DTT,含SDS含SDSOxidized - Native不还原,不变性不含β-巯基乙醇或DTT,不含SDS不含SDS根据待测蛋白分子量大小确定凝胶浓度蛋白分子量(kDa)凝胶浓度(%)4-402012-451510-7012.515-1001025-20084、转膜根据不同的检测目的和待测蛋白的特性,选择合适的膜类型。常用的转移膜类型有:PVDF膜、NC膜和尼龙膜,其中PVDF和NC膜的使用频率最高。各种膜的技术参数及比较如下:PVDF膜NC膜尼龙膜灵敏度和分辨率高高高背景低低较高蛋白结合能力100-200ug/cm2(适用于SDS存在时与蛋白结合)80-100ug/cm2>400ug/cm2机械强度强干的膜易脆软而结实溶剂抗性强差差使用前是否需要浸润100%甲醛润湿缓冲液润湿缓冲液润湿适用染色方法胶体金、丽春红、酰胺黑、印度墨汁、考马斯亮兰胶体金、丽春红、酰胺黑、印度墨汁不能用阴离子染料适用检测方法显色法、化学发光、荧光、放射性、化学荧光、快速免疫检测显色法、化学发光、荧光、放射性显色、化学发光、放射性适用范围普通蛋白WB、糖蛋白检测、蛋白质测序、氨基酸分析、重复检测普通蛋白WB、氨基酸分析、重复检测。0.1um膜适用于7kDa以下蛋白低浓度小分子蛋白、酸性蛋白、糖蛋白、蛋白多糖、核酸检测常用价格高较低低

6,western blot的具体步骤

现在网上报名还可以更改密码? 你说的是网上填报志愿系统吧? www.whzkb.cn 主页上就是网上志愿填报系统 初始密码是身份证号 http://59.42.244.27/ 志愿系统的地址
ZQ,我是SP。你直接进网站 http://211.67.74.16/wb/index.asp,最上面有更改密码。然后你把你所想改的密码改过来即可。我QQ上有我所发的消息。
6月10日至18日、6月28日至7月3日考生填报志愿网址 01 武汉市 http://www.whzkb.cn http://www.whzkb.cn 02 黄石市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 03 十堰市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 05 宜昌市 http://58.19.178.105/gkzy2009 http://58.19.178.105/gkzy2009 06 襄樊市 http://219.138.57.223 http://211.67.70.8 07 鄂州市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 08 荆门市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 09 孝感市 http://zsks.xgjy.cn http://zsks.xg.e21.cn 10 荆州市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 11 黄冈市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 23 咸宁市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 28 恩施自治州 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 90 神农架林区 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 91 随州市 http://www.hbszzk.com/gkzy2009 http://www.hbszzk.com/gkzy2009 94 仙桃市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 95 天门市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn 96 潜江市 http://tbzy-dx.hubzs.com.cn http://tbzy-jy.hubzs.com.cn
录取期间,省招办将通过湖北招生信息网( http://zsxx.e21.edu.cn )及时提供考生电子档案运行的七种状态,考生凭高考报名号或准考证号以及身份证号查询。 据介绍,昨日向省招办咨询的九成考生,都涉及录取情况。为此,省招办再次提请考生在录取期间,注意查询电子档案运行的7种状态:  (1)自由可投:表示该考生的档案没有投出去或投出去后又被学校退档,如是被学校退档,考生可以看到最近一次院校退档的理由。  (2)已经投档:表示省招办已将档案投给了院校,但院校还未下载投档信息。  (3)院校在阅:表示院校已下载了投档信息,正在审阅考生的电子档案。院校在阅并不表示考生已经被录取,省招办投给院校的档案数一般多于招生计划数,院校通过阅档后还要退出不予录取的考生档案。  (4)预退档:表示该考生因种种原因院校不予录取,院校向省招办提出退档,对每一个预退档的考生,院校都会注明退档的理由。  (5)预录取:表示院校准备录取该考生,已通过网络将拟录取名单提交给省招办,等待省招办网上录检审核。  (6)录取待审:表示院校拟录取名单已通过省招办网上录检审核,但录取名册还未经省招办审核签字盖章。  (7)录取:表示录取名册已经过省招办办理了审核签字手续,加盖了录取专用章。 下载百度工具栏:随时搜索湖北高考相关信息
http://tbzy-dx.hubzs.com.cn/
http://wb.nczsks.com/scwb/Login_ZY.aspx
(PS 楼主可以百度嘛,网上关于WB的实验太多了)Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理 与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。二、试剂准备1、SDS-PAGE试剂:见电泳实验。2、匀浆缓冲液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml;10%SDS 6.0ml;β-巯基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至1000ml。4、0.01M PBS(pH7.4):NaCl 8.0g;KCl 0.2g;Na2HPO4 1.44g;KH2PO4 0.24g;加ddH2O至1000ml。5、膜染色液:考马斯亮兰 0.2g;甲醇80ml;乙酸2ml;ddH2O118 ml。包被液(5%脱脂奶粉,现配):脱脂奶粉1.0g 溶于20ml的0.01M PBS中。6、显色液:DAB 6.0mg;0.01M PBS 10.0ml;硫酸镍胺 0.1ml;H202 1.0μl。三、操作步骤(一)蛋白质样品获得:细菌诱导表达后,可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞,真核细胞加匀浆缓冲液,机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃,13,000g离心15min。取上清液作为样品。(二)电泳:制备电泳凝胶,进行SDS-PAGE。(三)转移:(半干式转移)1、电泳结束后将胶条割至合适大小,用转膜缓冲液平衡,5min×3次。2、膜处理:预先裁好与胶条同样大小的滤纸和NC膜,浸入转膜缓冲液中10min。3、转膜:转膜装置从下至上依次按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好,滤纸、凝胶、NC膜精确对齐,每一步去除气泡,上压500g重物,将碳板上多余的液体吸干。接通电源,恒流1mA/cm2,转移1.5hr。转移结束后,断开电源将膜取出,割取待测膜条做免疫印迹。将有蛋白标准的条带染色,放入膜染色液中50s后,在50%甲醇中多次脱色,至背景清晰,然后用双蒸水洗,风干夹于两层滤纸中保存,留与显色结果作对比。(四)免疫反应:1、用0.01M PBS洗膜,5min ×3次。2、加入包被液,平稳摇动,室温2hr。3、弃包被液,用0.01M PBS洗膜,5min×3次。4、加入一抗(按合适稀释比例用0.01M PBS稀释,液体必须覆盖膜的全部),4℃ 放置12hr以上。阴性对照,以1%BSA取代一抗,其余步骤与实验组相同。5、弃一抗和1%BSA,用0.01M PBS分别洗膜,5min×4次。6、加入辣根过氧化物酶偶联的二抗(按合适稀释比例用0.01M PBS稀释),平稳摇动,室温2hr。7、弃二抗,用0.01M PBS洗膜,5min×4次。8、加入显色液,避光显色至出现条带时放入双蒸水中终止反应。四、注意事项1、一抗、二抗的稀释度、作用时间和温度对不同的蛋白要经过预实验确定最佳条件。2、显色液必须新鲜配置使用,最后加入H2O2。3、DAB有致癌的潜在可能,操作时要小心仔细
百度视频输入western blot就有
其实我看了步骤也不是很明白,,,你弄懂了,可以教教我。。。THANKS

7,求助Western Blot实验做55KD蛋白的条件

梦中的婚礼 要很熟练才能弹好 建议先不管和弦(只看大写字母) 大小写一起的是和弦. T T U Uc V Vh U Uc T Th Q Qc O Oh M Mc S Sb R Rf Q Rk S Rf k f R Rb S Sg T Tb U Ug S Sb P Pg R Ra Q Qe P Qj R Qc Q M Oc Q Ph Qc M Oh Q Pc Q M Oc R Qh Rb M Of R Qk Rf R Qk R Rf S S Tb S Tg Qa Q M Oc Q Ph Qc M Oh Q Pc Q M Oc R Qh Rb M Of R Qk Rf R Qk R Rf S S Tb S Tg Qa V Qc Q rh rb Pf P Uk U Pb P Qg Qa O Oe T S T Oc O Ph P Nd Q Pi Qc d e V Vc V Wh Wb Vf U Tk S Sb T Sg Qa h g V V Vc V Wh Wb Vf U Tk S Sb T Sg T c h c h c h c V Vc V Wh Wb Vf U Tk S Sb T Sg Qa h g V V Vc V Wh Wb Vf U Tk S Sb T Sg T c h c h c h c 小星星 和弦版 注意l不是I,是小写的L Oh l Oj l Sh l Sj l Th m Tk m Sh l j l Rg l Ri l Qh l Qj l Pe i Pg i Oh l j l Sg l Si l Rg l Ri l Qh l Qj l Pg l i l Sg l Si l Rg l Ri l Qh l Qj l Pg l i l Oh l Oj l Sh l Sj l Th m Tk m Sh l j l Rg l Ri l Qh l Qj l Pe i Pg i Oh l j l 铃儿响叮当 和弦版 HLJL HLJL (Hq)(Jq)(Hq)J (Hq)(Jq)(Hq)J (Hq)(Js)(Ho)(Lp)(Hq)LJL (Hr)(Kr)(Hr)K (Hr)(Jq)(Hq)(Jq)(Jq) (Hq)(Ip)(Ip)(Hq) (Ep)L(Es)L HLJL HLJL (Hq)(Jq)(Hq)J (Hq)(Jq)(Hq)J (Hq)(Js)(Ho)(Lp)(Hq)LJL (Hr)(Kr)(Hr)K (Hr)(Jq)(Hq)(Jq)(Jq) (Is)(Is)(Fr)(Ip)(Ho)LJL 欢乐颂 和弦版 (jk)(jh)(ik)(jl)(jl)(ik)(jh)(gi)hh(gi)(jh)(jh)(gi)(gi)e (jk)(jh)(ik)(jl)(jl)(ik)(jh)(gi)hh(gi)(jh)(gi)hh (gi)(gi)(jh)h(gi)jkj(jh)(gi)jkjihie ~j~~(jh)(ik)(jl)(jl)(ik)(jh)(gi)hh(gi)(jh)(gi)h(jhec) @Title 红河谷(带和弦版) @Author AKFish @Date 2008-12-3 @Desc. 每组两个音,空格分开,需同时弹出。点[.]为占位符。 L. O. | Qa .e Qh Qj Ql .j | Ph Qe Pa Oe .h .j .l .j Lh Oe | Qa .e Oh Qj Sl .j | Rh Qe Pe .e .g .i .k .i Sg Re | Qa .e Qh Pj Ol .j | Ph Qe Sd Rf .h .k .m .k Mo Mf | Le .e Ng Oi Pk .i | Qg Pe Oa .e .h .j ae hj @Title 雪绒花(带和弦版) @Author AKFish @Date 2008-12-3 @Desc. 每组两个音,空格分开,需同时弹出。点[.]为占位符。 Qh .j Sl Wg .i .l Vh .j Sl Rh .k .m Qh .j Ql Qh Rj Sl Th .k .m Sg .i .l Qh .j Sl Wg .i .l Vh .j Sl Rh .k .m Qh .j Sl Sl Tk Ui Vh .j .l Vh jl .. Wg .i Sl Ue Ti Sl Qh .j Sl Vh .j .l Th .k Vt Wg .i Vl Ue .i .l Sg .i .l Qh .j Sl Wg .i .l Vh .j Sl Rh .k .m Qh .j Sl Sl Tk Ui Vh .j .l Vh jl .. 月亮代表我的心 和弦版 e(hj)jlh(eg)jl l(km)no(mk)(jl) ji(hf)hh ji(hf)hh ij(ig)hfj(ig) e(hj)jlh(eg)jl l(km)no(mk)(jl) ji(hf)hh ji(hf)hh ij(ig)fgi(jh) l(hj)ihl(ge) fg(df)gfe(jh) l(hj)ihl(ge) fg(fh)hhij(gi) ehjlhgjl lmnoml ji(hf)hh ji(hf)hh ijifgih ji(fh)(fh)(fh) jl(fh)(fh)(fh) ij(ig)(df)(eg)-i-(ha)- 花火(和弦版) HIJL(Md) M(Mf)LJK(Lg) HIJH(Kf) KKKJ(Ig)J JK(LG)J(Oh) OOPNM(Ng) LNOML(Mf) MMLKJ(Le)I LL(Qa)PQO(Nb)MNL(Md)LM(Hc) M(Mf)LJK(Le) N(Nc)MLK(Le) M(Md)ML(Kf)M(Lge) JJ(Of)NOM(Ne)MNL(Md)LMH HI(Je)(Lh)(Mhf) M(Lh)L(Oi)N(Ojv) HIJL(Md) M(Md)LJK(Lig) NN(Md)LK(Le) O(Od)N(Mf)N(Ohv) 天空之城和弦版 TU(fv)hj(hU)(fV)h(jX)-(cU)egece(gT)(eS)(aT)df(Sd)(aT)d(Vf)- (Sh)ehijl(cR)(aQ)(Rb)fi(Qc)(bR)dV-(QF)cfghcV(Ud)bdfhgfc-(Uc)cfgJ TU(fv)hj(hU)(fV)h(jX)-(cU)egece(gT)(eS)(aT)df(Sd)(aT)d(Vf)- (Sh)ehijl(cR)(aQ)(Rb)fi(Qc)(bR)dV-(Wf)ca(xc)(fV)gfc (vd)ut-(ub)-q-(tf)cfghj--------T @Title 蒲公英的约定[全](带和弦版)[beta] @Author AKFish @Date 2008-12-6 @Desc. 每组两个音,空格分开,需同时弹出。点[.]为占位符。Beta版,某些部分不是很满意,-_-||。 Q S V X Xk .o .q Y Wk .n .p Wj .n Zp U Vf .j .o Xi Ym Zo V Ve .i Wn .l Xh .l .o .l Qn S Vj X Xd .h .m Yh Wd .i .n Wc .g Zl Ug Vf .j .o .j Xi Ym Zo Vi Ve .i Wn .l Vh .l .o .p .h Q Q R Sh Sl So Sl .g .l Un Vl Vf .j .m .j Ve Uj Wl Tj .d Sh Sk Wh .e Vj Xl Xj Xh .l .o .l Vh Wl Xo Xh .c Xg Yj Xg .c Wg Xj Wg Vf .j .l .j Tf Uj Vl Wj .b Vf Vi Tf .b Xf Xi Xf We .i .l .m .n Q Q R Sh Sl So Sl .g Tl Un Sl Wf Vj .m .j Ve Uj Wl Tj .d Sh Sk Wh .e Vi Xl Xi Xh .l .o .l Vh Wl Xo Xh .c Xg Yj Xg .c Wg Xj Vg Vf .j .m .j Tf Uj Vm Wj .b Vf Vi Tf .b Xf Yi Wb We .i .l .m Qn S Vj X Xd .h .m Yh Wd .i .n Wc .g Zl Ug Vf .j .o .j Xi Ym Zo Vi Ve .i Wn .l Xh .l .o .p Qn S Vj X Xd .h .m Yh Wd .i .n Wc .g Zl Ug Vf .j .o .j Xi Ym Zo Vi Ve .i Wn .l Vh .l .o .p Q S. V. W. Xk Ym Zo Vq Vl .n Wp V Vm .o .q .o .n Sk Vq Wo Xk Yo Zq V. Vl .n Wp .n Vh .l Rp .l Qa
试试下面的条件:WB用膜类型、孔径:NC(0.45)膜转膜方式(恒压、恒流):湿转 恒流200mA转膜时间:70min
你说呢...
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8,请问湖北高考网上报名系统更改初始密码的网址

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9,键盘钢琴曲谱

WindowBlinds 是一款专门的 Windows 系统美化应用程序,尤其是对全体 Windows 应用程序窗口的更改,安装和运行非常简单。Window Blinds 安装后可以整合于 Windows 操作系统中。而且该软件是目前惟一获得微软许可的第三方系统美化软件。使用 Windows Blinds 你可以在显示属性中选择多种不同的视窗风格。而且你还可以下载超过 1000 种不同的桌面风格,甚至很容易地使用 SDK 开发程序包创建属于你自己的视窗。 安装说明: 1.请首选安装原版程序. 2.请为汉化补丁安装指定正确的安装目录. 3.汉化补丁中带有破解程序,请首选结束WbSrv.dll的进程,因为原版程序安装完成后此文件就开始运行,如果不结束,将不能完成补丁的安装.(方法1:重启后在安全模式下运行汉化补丁完成安装 方法2:使用Unlocker之类的工具结束WbSrv.dll进程完成汉化补丁的安装) 4.由于语言包的原因,程序中有个别词和句子没有被翻译,此为语言包不完整造成的,非汉化原因. 5.如果安装后界面并未成为简体中文,请手动设置:UI Setting--->Default 即可 下载: 1. WindowBlinds V5.0 汉化补丁 WindowBlinds 是一款专门的 Windows 系统美化应用程序 www.skycn.com/soft/2389.html 2. WindowBlinds 5.0 enhanced 汉化补丁 WindowBlinds是一款专门的Windows系统美化应用程序,尤其是对全体Windows应用程序窗口 wh.onlinedown.net/soft/3283.htm 3. WindowBlinds汉化补丁 V5.0 WindowBlinds 是一款专门的 Windows 系统美化应用程序,尤其是对全体 Windows 应? download.21cn.com/list.php?id=3791 4. WindowBlinds V4.51 Enhanced 汉化补丁 software.ty.sx.cn/soft/1300.html 5. WindowBlinds V4.51 Enhanced 汉化补丁 www.yqdown.com/soft/976.htm
给你这个你试试. WindowBlinds 5.02 Enhanced 黄金版 2005.12.20 http://down.htcnc.net/Software/catalog19/1210.html
WindowBlinds V5.51 Build 97 汉化版 这个软件除了可以让你使用 BMP 图形作为程序的背景底图之外,它还可让你 Windows 中的所有程序的窗口标题条 (Titlebar) 变成麦金塔电脑 Mac OS8 或是 BeOS 的样子,而你也可以将 Windows 95 的窗口标题条(Titlebar) 弄成像 Windows 98 一样的渐层显示,渐层的颜色还可以自订,标题条的文字可让你放在中间而不是预设的左边。另外各位可以发现现在一般的新软件,其工具条的按钮形式都已改成「浮动式」的,也就是当鼠标移到按钮上时它会浮起来,比较美观而且有立体感,但仍能有一些软件(如 ACDSee、NetTerm) 依旧是旧式的按钮形式, http://disk1.8f.com.cn/mypane.aspx?down=ok&filepath=xiaodou/软件收藏/WindowBlinds6汉化破解完整包.rar 这是下载地址
梦中的婚礼 要很熟练才能弹好 建议先不管和弦(只看大写字母) 大小写一起的是和弦. T T U Uc V Vh U Uc T Th Q Qc O Oh M Mc S Sb R Rf Q Rk S Rf k f R Rb S Sg T Tb U Ug S Sb P Pg R Ra Q Qe P Qj R Qc Q M Oc Q Ph Qc M Oh Q Pc Q M Oc R Qh Rb M Of R Qk Rf R Qk R Rf S S Tb S Tg Qa Q M Oc Q Ph Qc M Oh Q Pc Q M Oc R Qh Rb M Of R Qk Rf R Qk R Rf S S Tb S Tg Qa V Qc Q rh rb Pf P Uk U Pb P Qg Qa O Oe T S T Oc O Ph P Nd Q Pi Qc d e V Vc V Wh Wb Vf U Tk S Sb T Sg Qa h g V V Vc V Wh Wb Vf U Tk S Sb T Sg T c h c h c h c V Vc V Wh Wb Vf U Tk S Sb T Sg Qa h g V V Vc V Wh Wb Vf U Tk S Sb T Sg T c h c h c h c 小星星 和弦版 注意l不是I,是小写的L Oh l Oj l Sh l Sj l Th m Tk m Sh l j l Rg l Ri l Qh l Qj l Pe i Pg i Oh l j l Sg l Si l Rg l Ri l Qh l Qj l Pg l i l Sg l Si l Rg l Ri l Qh l Qj l Pg l i l Oh l Oj l Sh l Sj l Th m Tk m Sh l j l Rg l Ri l Qh l Qj l Pe i Pg i Oh l j l 铃儿响叮当 和弦版 HLJL HLJL (Hq)(Jq)(Hq)J (Hq)(Jq)(Hq)J (Hq)(Js)(Ho)(Lp)(Hq)LJL (Hr)(Kr)(Hr)K (Hr)(Jq)(Hq)(Jq)(Jq) (Hq)(Ip)(Ip)(Hq) (Ep)L(Es)L HLJL HLJL (Hq)(Jq)(Hq)J (Hq)(Jq)(Hq)J (Hq)(Js)(Ho)(Lp)(Hq)LJL (Hr)(Kr)(Hr)K (Hr)(Jq)(Hq)(Jq)(Jq) (Is)(Is)(Fr)(Ip)(Ho)LJL 欢乐颂 和弦版 (jk)(jh)(ik)(jl)(jl)(ik)(jh)(gi)hh(gi)(jh)(jh)(gi)(gi)e (jk)(jh)(ik)(jl)(jl)(ik)(jh)(gi)hh(gi)(jh)(gi)hh (gi)(gi)(jh)h(gi)jkj(jh)(gi)jkjihie ~j~~(jh)(ik)(jl)(jl)(ik)(jh)(gi)hh(gi)(jh)(gi)h(jhec) @Title 红河谷(带和弦版) @Author AKFish @Date 2008-12-3 @Desc. 每组两个音,空格分开,需同时弹出。点[.]为占位符。 L. O. | Qa .e Qh Qj Ql .j | Ph Qe Pa Oe .h .j .l .j Lh Oe | Qa .e Oh Qj Sl .j | Rh Qe Pe .e .g .i .k .i Sg Re | Qa .e Qh Pj Ol .j | Ph Qe Sd Rf .h .k .m .k Mo Mf | Le .e Ng Oi Pk .i | Qg Pe Oa .e .h .j ae hj @Title 雪绒花(带和弦版) @Author AKFish @Date 2008-12-3 @Desc. 每组两个音,空格分开,需同时弹出。点[.]为占位符。 Qh .j Sl Wg .i .l Vh .j Sl Rh .k .m Qh .j Ql Qh Rj Sl Th .k .m Sg .i .l Qh .j Sl Wg .i .l Vh .j Sl Rh .k .m Qh .j Sl Sl Tk Ui Vh .j .l Vh jl .. Wg .i Sl Ue Ti Sl Qh .j Sl Vh .j .l Th .k Vt Wg .i Vl Ue .i .l Sg .i .l Qh .j Sl Wg .i .l Vh .j Sl Rh .k .m Qh .j Sl Sl Tk Ui Vh .j .l Vh jl .. 月亮代表我的心 和弦版 e(hj)jlh(eg)jl l(km)no(mk)(jl) ji(hf)hh ji(hf)hh ij(ig)hfj(ig) e(hj)jlh(eg)jl l(km)no(mk)(jl) ji(hf)hh ji(hf)hh ij(ig)fgi(jh) l(hj)ihl(ge) fg(df)gfe(jh) l(hj)ihl(ge) fg(fh)hhij(gi) ehjlhgjl lmnoml ji(hf)hh ji(hf)hh ijifgih ji(fh)(fh)(fh) jl(fh)(fh)(fh) ij(ig)(df)(eg)-i-(ha)- 花火(和弦版) HIJL(Md) M(Mf)LJK(Lg) HIJH(Kf) KKKJ(Ig)J JK(LG)J(Oh) OOPNM(Ng) LNOML(Mf) MMLKJ(Le)I LL(Qa)PQO(Nb)MNL(Md)LM(Hc) M(Mf)LJK(Le) N(Nc)MLK(Le) M(Md)ML(Kf)M(Lge) JJ(Of)NOM(Ne)MNL(Md)LMH HI(Je)(Lh)(Mhf) M(Lh)L(Oi)N(Ojv) HIJL(Md) M(Md)LJK(Lig) NN(Md)LK(Le) O(Od)N(Mf)N(Ohv) 天空之城和弦版 TU(fv)hj(hU)(fV)h(jX)-(cU)egece(gT)(eS)(aT)df(Sd)(aT)d(Vf)- (Sh)ehijl(cR)(aQ)(Rb)fi(Qc)(bR)dV-(QF)cfghcV(Ud)bdfhgfc-(Uc)cfgJ TU(fv)hj(hU)(fV)h(jX)-(cU)egece(gT)(eS)(aT)df(Sd)(aT)d(Vf)- (Sh)ehijl(cR)(aQ)(Rb)fi(Qc)(bR)dV-(Wf)ca(xc)(fV)gfc (vd)ut-(ub)-q-(tf)cfghj--------T @Title 蒲公英的约定[全](带和弦版)[beta] @Author AKFish @Date 2008-12-6 @Desc. 每组两个音,空格分开,需同时弹出。点[.]为占位符。Beta版,某些部分不是很满意,-_-||。 Q S V X Xk .o .q Y Wk .n .p Wj .n Zp U Vf .j .o Xi Ym Zo V Ve .i Wn .l Xh .l .o .l Qn S Vj X Xd .h .m Yh Wd .i .n Wc .g Zl Ug Vf .j .o .j Xi Ym Zo Vi Ve .i Wn .l Vh .l .o .p .h Q Q R Sh Sl So Sl .g .l Un Vl Vf .j .m .j Ve Uj Wl Tj .d Sh Sk Wh .e Vj Xl Xj Xh .l .o .l Vh Wl Xo Xh .c Xg Yj Xg .c Wg Xj Wg Vf .j .l .j Tf Uj Vl Wj .b Vf Vi Tf .b Xf Xi Xf We .i .l .m .n Q Q R Sh Sl So Sl .g Tl Un Sl Wf Vj .m .j Ve Uj Wl Tj .d Sh Sk Wh .e Vi Xl Xi Xh .l .o .l Vh Wl Xo Xh .c Xg Yj Xg .c Wg Xj Vg Vf .j .m .j Tf Uj Vm Wj .b Vf Vi Tf .b Xf Yi Wb We .i .l .m Qn S Vj X Xd .h .m Yh Wd .i .n Wc .g Zl Ug Vf .j .o .j Xi Ym Zo Vi Ve .i Wn .l Xh .l .o .p Qn S Vj X Xd .h .m Yh Wd .i .n Wc .g Zl Ug Vf .j .o .j Xi Ym Zo Vi Ve .i Wn .l Vh .l .o .p Q S. V. W. Xk Ym Zo Vq Vl .n Wp V Vm .o .q .o .n Sk Vq Wo Xk Yo Zq V. Vl .n Wp .n Vh .l Rp .l Qa
梦中的婚礼 要很熟练才能弹好 建议先不管和弦(只看大写字母) 大小写一起的是和弦. T T U Uc V Vh U Uc T Th Q Qc O Oh M Mc S Sb R Rf Q Rk S Rf k f R Rb S Sg T Tb U Ug S Sb P Pg R Ra Q Qe P Qj R Qc Q M Oc Q Ph Qc M Oh Q Pc Q M Oc R Qh Rb M Of R Qk Rf R Qk R Rf S S Tb S Tg Qa Q M Oc Q Ph Qc M Oh Q Pc Q M Oc R Qh Rb M Of R Qk Rf R Qk R Rf S S Tb S Tg Qa V Qc Q rh rb Pf P Uk U Pb P Qg Qa O Oe T S T Oc O Ph P Nd Q Pi Qc d e V Vc V Wh Wb Vf U Tk S Sb T Sg Qa h g V V Vc V Wh Wb Vf U Tk S Sb T Sg T c h c h c h c V Vc V Wh Wb Vf U Tk S Sb T Sg Qa h g V V Vc V Wh Wb Vf U Tk S Sb T Sg T c h c h c h c 小星星 和弦版 注意l不是I,是小写的L Oh l Oj l Sh l Sj l Th m Tk m Sh l j l Rg l Ri l Qh l Qj l Pe i Pg i Oh l j l Sg l Si l Rg l Ri l Qh l Qj l Pg l i l Sg l Si l Rg l Ri l Qh l Qj l Pg l i l Oh l Oj l Sh l Sj l Th m Tk m Sh l j l Rg l Ri l Qh l Qj l Pe i Pg i Oh l j l 铃儿响叮当 和弦版 HLJL HLJL (Hq)(Jq)(Hq)J (Hq)(Jq)(Hq)J (Hq)(Js)(Ho)(Lp)(Hq)LJL (Hr)(Kr)(Hr)K (Hr)(Jq)(Hq)(Jq)(Jq) (Hq)(Ip)(Ip)(Hq) (Ep)L(Es)L HLJL HLJL (Hq)(Jq)(Hq)J (Hq)(Jq)(Hq)J (Hq)(Js)(Ho)(Lp)(Hq)LJL (Hr)(Kr)(Hr)K (Hr)(Jq)(Hq)(Jq)(Jq) (Is)(Is)(Fr)(Ip)(Ho)LJL 欢乐颂 和弦版 (jk)(jh)(ik)(jl)(jl)(ik)(jh)(gi)hh(gi)(jh)(jh)(gi)(gi)e (jk)(jh)(ik)(jl)(jl)(ik)(jh)(gi)hh(gi)(jh)(gi)hh (gi)(gi)(jh)h(gi)jkj(jh)(gi)jkjihie ~j~~(jh)(ik)(jl)(jl)(ik)(jh)(gi)hh(gi)(jh)(gi)h(jhec) @Title 红河谷(带和弦版) @Author AKFish @Date 2008-12-3 @Desc. 每组两个音,空格分开,需同时弹出。点[.]为占位符。 L. O. | Qa .e Qh Qj Ql .j | Ph Qe Pa Oe .h .j .l .j Lh Oe | Qa .e Oh Qj Sl .j | Rh Qe Pe .e .g .i .k .i Sg Re | Qa .e Qh Pj Ol .j | Ph Qe Sd Rf .h .k .m .k Mo Mf | Le .e Ng Oi Pk .i | Qg Pe Oa .e .h .j ae hj @Title 雪绒花(带和弦版) @Author AKFish @Date 2008-12-3 @Desc. 每组两个音,空格分开,需同时弹出。点[.]为占位符。 Qh .j Sl Wg .i .l Vh .j Sl Rh .k .m Qh .j Ql Qh Rj Sl Th .k .m Sg .i .l Qh .j Sl Wg .i .l Vh .j Sl Rh .k .m Qh .j Sl Sl Tk Ui Vh .j .l Vh jl .. Wg .i Sl Ue Ti Sl Qh .j Sl Vh .j .l Th .k Vt Wg .i Vl Ue .i .l Sg .i .l Qh .j Sl Wg .i .l Vh .j Sl Rh .k .m Qh .j Sl Sl Tk Ui Vh .j .l Vh jl .. 月亮代表我的心 和弦版 e(hj)jlh(eg)jl l(km)no(mk)(jl) ji(hf)hh ji(hf)hh ij(ig)hfj(ig) e(hj)jlh(eg)jl l(km)no(mk)(jl) ji(hf)hh ji(hf)hh ij(ig)fgi(jh) l(hj)ihl(ge) fg(df)gfe(jh) l(hj)ihl(ge) fg(fh)hhij(gi) ehjlhgjl lmnoml ji(hf)hh ji(hf)hh ijifgih ji(fh)(fh)(fh) jl(fh)(fh)(fh) ij(ig)(df)(eg)-i-(ha)- 花火(和弦版) HIJL(Md) M(Mf)LJK(Lg) HIJH(Kf) KKKJ(Ig)J JK(LG)J(Oh) OOPNM(Ng) LNOML(Mf) MMLKJ(Le)I LL(Qa)PQO(Nb)MNL(Md)LM(Hc) M(Mf)LJK(Le) N(Nc)MLK(Le) M(Md)ML(Kf)M(Lge) JJ(Of)NOM(Ne)MNL(Md)LMH HI(Je)(Lh)(Mhf) M(Lh)L(Oi)N(Ojv) HIJL(Md) M(Md)LJK(Lig) NN(Md)LK(Le) O(Od)N(Mf)N(Ohv) 天空之城和弦版 TU(fv)hj(hU)(fV)h(jX)-(cU)egece(gT)(eS)(aT)df(Sd)(aT)d(Vf)- (Sh)ehijl(cR)(aQ)(Rb)fi(Qc)(bR)dV-(QF)cfghcV(Ud)bdfhgfc-(Uc)cfgJ TU(fv)hj(hU)(fV)h(jX)-(cU)egece(gT)(eS)(aT)df(Sd)(aT)d(Vf)- (Sh)ehijl(cR)(aQ)(Rb)fi(Qc)(bR)dV-(Wf)ca(xc)(fV)gfc (vd)ut-(ub)-q-(tf)cfghj--------T @Title 蒲公英的约定[全](带和弦版)[beta] @Author AKFish @Date 2008-12-6 @Desc. 每组两个音,空格分开,需同时弹出。点[.]为占位符。Beta版,某些部分不是很满意,-_-||。 Q S V X Xk .o .q Y Wk .n .p Wj .n Zp U Vf .j .o Xi Ym Zo V Ve .i Wn .l Xh .l .o .l Qn S Vj X Xd .h .m Yh Wd .i .n Wc .g Zl Ug Vf .j .o .j Xi Ym Zo Vi Ve .i Wn .l Vh .l .o .p .h Q Q R Sh Sl So Sl .g .l Un Vl Vf .j .m .j Ve Uj Wl Tj .d Sh Sk Wh .e Vj Xl Xj Xh .l .o .l Vh Wl Xo Xh .c Xg Yj Xg .c Wg Xj Wg Vf .j .l .j Tf Uj Vl Wj .b Vf Vi Tf .b Xf Xi Xf We .i .l .m .n Q Q R Sh Sl So Sl .g Tl Un Sl Wf Vj .m .j Ve Uj Wl Tj .d Sh Sk Wh .e Vi Xl Xi Xh .l .o .l Vh Wl Xo Xh .c Xg Yj Xg .c Wg Xj Vg Vf .j .m .j Tf Uj Vm Wj .b Vf Vi Tf .b Xf Yi Wb We .i .l .m Qn S Vj X Xd .h .m Yh Wd .i .n Wc .g Zl Ug Vf .j .o .j Xi Ym Zo Vi Ve .i Wn .l Xh .l .o .p Qn S Vj X Xd .h .m Yh Wd .i .n Wc .g Zl Ug Vf .j .o .j Xi Ym Zo Vi Ve .i Wn .l Vh .l .o .p Q S. V. W. Xk Ym Zo Vq Vl .n Wp V Vm .o .q .o .n Sk Vq Wo Xk Yo Zq V. Vl .n Wp .n Vh .l Rp .l Qa

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